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南京景竹生物科技有限公司

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公司动态
槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定
发布时间:2013-03-20        浏览次数:4266        返回列表
 槐米为豆科植物槐(Sophora japonica L.)的未开放花蕾。味苦性凉、具清热、之功。常用于治疗多种出血症:肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。槐米常炒炭应用。
槐米的主要化学成分为芦丁,其含量可达12~16%,其次含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。芦丁具有Vitp样作用,可降低毛细血管脆性和调节通透性。临床上用作毛细血管脆性引起的出血症,常作为症的辅助治疗药。
一.检识反应
1.芦丁的定性反应
取芦丁适量,加乙醇使溶解,分成三份供下述试验用:
(1)盐酸试验:取样品液适量,加2滴浓HCl、再酌加少许,即产生剧烈的反应,并逐渐出现红色至深红色。
(2)锆-枸试验:取样品液适量,然后加 2%ZrOCl2的甲醇溶液,注意观察颜色变化,再加入2%枸椽酸的甲醇溶液,并详细记录颜色变化。
(3)α-萘酚-浓硫酸反应:取样品液适量,加等体积的l0%α-萘酚乙醇溶液,摇匀,沿管壁缓加浓硫酸,注意观察两液界面的颜色。
2.芦丁的UV
(1)鉴定试剂的配制
①甲醇钠溶液:取0.25g金属钠,切碎,小心加入色谱甲醇10ml中,此液置于玻璃瓶中,用橡皮塞密封。
②三氯化铝溶液:取1g无水三氯化铝,小心加入色谱甲醇20ml中,放置24小时后全部溶解即得。
③醋酸钠:用无水粉末醋酸钠。
④⑤硼酸饱和溶液:取无水硼酸,加入适量色谱甲醇、制成饱和溶液。
(上述贮备液可放置六个月)
(2)芦丁溶液的配制
精密称取芦丁纯品0.5g,用甲醇适量溶解至50ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度。
(3)光谱的测定
①甲醇光谱:取样品液置石英杯中,至200~500nm内进行扫描,重复一次,观察紫外光谱。
②甲醇钠光谱:取样品液置石英杯中,加入甲醇钠溶液3滴后,立即测定,放置5分钟后再测一次。
③三氯化铝光谱,在盛有样品液的石英杯中,加入三氯化铝6滴,放置1分钟后进行测定。测定后加入3滴盐酸溶液(盐酸:水=1:1)再进行测定。
④醋酸钠光谱:取样品液约3ml,加入过量的无水醋酸钠固体,摇匀(杯底剩有约2mg的醋酸钠),加入醋酸钠后两分钟内测定,5分钟到10分钟后再测定一次。
3.芦丁及槲皮素的色谱
支持剂:中速层析滤液(5×20cm)
展开剂:正丁醇-醋酸-水(4:1:5)上层
样品:自制槲皮素的乙醇溶液
自制芦丁的乙醇溶液
对照品:槲皮素标准品的乙醇溶液
芦丁标准品的乙醇溶液
显色剂:三氯化铝乙醇溶液喷雾
4.糖的纸色谱检识
支持剂:中速层析滤纸(5×20cm)
样品:取水解后的滤液10ml,水浴加热,且在搅拌下加适量碳酸钡细粉至PH中性,过滤,取滤液并浓缩至2mI左右,放冷后,供纸色谱点样用。
对照品:1%葡萄糖标准品醇溶液及1%鼠李糖标准品醇溶液
展开剂:正丁醇-醋酸-水(4:1:5)上层
显色剂:喷以邻苯二甲酸苯胺溶液,105℃烘烤5分钟至斑点显色清晰。
 [实验说明及注意事项]
1.用石灰水调节芦丁提取溶液的PH,既可以达到碱提取芦丁的目的,还可以除去槐米中含有的大量粘液质。但钙离子浓度及pH值均不宜过高,否则多余的钙能与芦丁形成螯合物沉淀,同时黄酮母核在强碱性条件下易被破坏。
2.用HCl调PH时,应注意PH不要过低,因为PH过低(PH2以下)会使芦丁形成钅羊               盐而使已形成的沉淀重新溶解,同时黄酮母核也会在强碱性条件下被破坏,导致收率下降。
3 .注意观察槲皮素制备过程中的实验现象。